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使用制備液相色譜的工作流程和技巧

本文的重點是快速液相色譜和高效液相色譜。沒有一種完美的協議合適每一種別離目的。因此,建議為您的特定使用程序優(yōu)化辦法。經過本文中列出的建議以及一些前期閱覽和測驗,您將輕松純化您正在尋找的組件。


        一、快速液相色譜純化


        運用快速色譜法進行純化的缺陷是該辦法固有的分辨率較低。快速液相色譜柱運用更大的粒徑和柱容量,允許運用更多的開始資料,但以分辨率和純度為價值。假如化合物不需求更高的純度,或者假如下一步將進行 HPLC,這或許是您的選擇。


        1、確認溶劑體系


        樣品的純度(即混合物中有多少化合物)能夠運用薄層色譜法 (TLC) 和組分的相對極性進行定性測定。運用 TLC 預先篩選*佳活動相和固定相將節(jié)省時間和金錢。依據所運用的溶劑,您或許需求在通風柜中運轉色譜柱,因為存在潛在的危險煙霧。


        2、確認要運用的列


        選擇別離柱時要考慮樣品量。色譜柱裝載量因粒徑和體積而異。一般來說,快速液相色譜柱的*大裝載量約為硅膠重量的 10%。較大的色譜柱能夠處理千克數量的色譜柱,但假如您沒有那么多開始資料,那么您只會在硅膠和額定的溶劑上糟蹋金錢來運轉這些大型色譜柱。在確認液相剖析柱、基質和溶劑后,您就能夠進行快速別離了。


        3、液相色譜柱


        不管您是自己裝柱還是購買一根預裝柱,按重量核算硅膠與化合物的比例(即硅膠:化合物)都將幫助您完成更有用的別離。恒譜生提供各種硅膠色譜柱,像uHPLCs高效液相C18-AQ剖析柱對親水性和極性化合物具有更強的保存才能和選擇性。


        假如包含了別離不太雜亂的溶液需求 30:1 到 50:1 的比率,但更雜亂的別離或許需求高達 120:1 的比率。手動運轉色譜柱時,切勿讓溶劑管線低于硅膠,不然氣孔會在硅膠上形成看起來像裂縫的長線。這大大降低了別離的功率。


         二、HPLC純化


       在 HPLC 上運轉樣品適當簡略,因為在快速液相色譜柱上預純化進程中確認的許多參數都能夠使用于此進程。假如您在沒有預純化過程的情況下運轉 HPLC 別離,請考慮運用上面列出的指南來開發(fā)合適的 HPLC 辦法。運用 HPLC 時的另一個考慮因素是核算的背壓。因為 HPLC 色譜柱的粒徑更小,可完成更高質量的別離,因此這些體系往往在高壓條件下運轉,而閃蒸別離的壓力相對較低。運用有關粒徑和形狀、色譜柱內徑和溶劑規(guī)格的信息核算估計的背壓。


       與恒譜生技術支持專家進行簡略評論能夠節(jié)省您名貴的時間,并使您能夠在瞬間別離化合物!

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